解毒護(hù)肝方經(jīng)PPARs信號(hào)通路激

藥物性肝損傷（Drug-induced liver injury，DILI） 是指過量或不當(dāng)使用藥物后，由其本身或代謝產(chǎn)物 引起的肝臟損傷。近年來 DILI 已成為嚴(yán)重威脅人類身 體健康的疾病之一。對(duì)乙酰氨基酚（acetaminophen， APAP）是臨床上常用的解熱鎮(zhèn)痛藥物，治療劑量下安 全有效，但長期大量使用或聯(lián)合用藥時(shí)易誘發(fā) DILI。近幾十年來，APAP 引起的急性肝損傷已經(jīng) 成為急性肝衰竭的主要原因 。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

Wistar 大鼠 60 只，雌雄各半，清潔級(jí)， 體質(zhì)量（200±20）g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限 公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001， 動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：11400700181914。

1.2 藥物與試劑

解毒護(hù)肝方，組方為柴胡 10 g、醋香附 15 g、炒白芍 15 g、五味子 10 g、黃芪 15 g、白 術(shù) 10 g、茵陳 15 g、黃芩 10 g、丹參 15 g、楮實(shí)子 10 g、生甘草 10 g，選用廣東一方制藥有限公司生產(chǎn) 的中藥配方顆粒劑，生產(chǎn)批號(hào)分別為：17070084、 17110018、16120149、17100125、18010046、17090124、 17060195、17120138、17110024、11080711、17120058， 用 100 ℃蒸餾水沖泡，將配制好的藥液置 4 ℃冰箱貯 存?zhèn)溆茫? 周配 1 次。水飛薊賓膠囊，天津天士力制 藥股份有限公司生產(chǎn)，每粒含水飛薊賓 35 mg，生產(chǎn) 批號(hào)：750709172，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字 H20040299， 用蒸餾水配制，置 4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆茫? 周配 1 次。 對(duì)乙酰氨基酚片，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司生 產(chǎn) ， 每 片 含 對(duì) 乙 酰 氨 基 酚 0.5 g， 生 產(chǎn) 批 號(hào) ： 016171002，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字 H13022763，用 40 ℃生理鹽水配制，將配制好的藥液置 4 ℃冰箱貯 存?zhèn)溆茫? 周配 1 次。 AST 試劑盒（批號(hào)：AUZ3645）、ALT 試劑盒（批 號(hào)：AUZ3689），貝克曼庫爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司； TP 試劑盒（批號(hào)：120441）、ALB 試劑盒（批號(hào)： 131311），中生北控生物科技股份有限公司；DBIL 試 劑盒（批號(hào)：A006），長春匯力生物技術(shù)有限公司； Rat IL-6 試劑盒（批號(hào)：BE45361）、Rat TNFα 試劑 盒（批號(hào)：BE45471），德國 IBL International GmbH 公司；Rat 5-LOX 試劑盒（批號(hào)：SEB355Ra），武漢云 克隆科技股份有限公司；白三烯 B4 試劑盒（批號(hào)： 520111）， 美 國 Cayman Chemical Company 公 司 ；Trizol （批 號(hào) ： 139603）， 美 國 Invitrogen 公 司 ； TIANScript cDNA 第 一 鏈 合 成 試 劑 盒（ 批 號(hào) ： P5011）、 SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）（批 號(hào)：Q5922），天根生化科技（北京）有限公司；氯 仿、異丙醇、無水乙醇，天津市永大化學(xué)試劑有限 公司等。

1.3 儀器

Humalyzer2000 半自動(dòng)生化儀，德國豪邁 公 司 ； DP73 數(shù) 碼 顯 微 鏡 ， 日 本 Olympus 公 司 ； HMIAS-2000 顯微圖像分析系統(tǒng)，武漢同濟(jì)醫(yī)科大 學(xué)；756MC 型紫外-可見分光光度計(jì)，上海精密科學(xué) 儀器有限公司；ELx800 酶標(biāo)儀，美國 BIO-TEK 公 司；HH · W21 · 600 型電熱恒溫水箱，余姚市東方 電工儀器廠；MDF-382E 型超低溫保存箱，日本 SANYO 公司；1- 15K 型高速冷凍離心機(jī)，美國 Sigma 公司；其林貝爾QL-902 渦旋振蕩儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；石蠟切片機(jī)（Leica）、熒光定量 PCR 儀 ABI7500，美國 Applied Biosystems 公司等。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察

正常組大鼠毛發(fā)滑順，有光澤， 精神狀態(tài)良好，行動(dòng)靈活，二便正常。與正常組比 較，模型組大鼠體質(zhì)量減輕，毛發(fā)無光澤，精神狀 態(tài)欠佳，喜臥；解毒護(hù)肝方和陽性藥組大鼠能不同 程度地改善大鼠的毛發(fā)光澤度、精神狀態(tài)、體質(zhì)量 以及行動(dòng)靈活性等情況。給予對(duì)乙酰氨基酚造模 前，經(jīng)統(tǒng)計(jì)各組大鼠體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P > 0.05）；造模及給藥 8 d 各組大鼠體質(zhì)量差異亦 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；造模及給藥 15 d，模型 組、陽性藥組、復(fù)方高劑量組的大鼠體質(zhì)量已有降 低趨勢(shì)（P > 0.05）。

2.2 解毒護(hù)肝方對(duì)肝損傷大鼠肝功能的影響

與正常 組比較，模型組大鼠血清 AST、ALT、ALB 和 DBIL 含量明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），提示肝損傷模型 復(fù)制成功。與模型組比較，復(fù)方低、中劑量組能顯著降低大鼠血清 AST、ALT 活性（P＜0.05，P＜0.01）；復(fù)方低劑量組顯著降低 DBIL 含量（P＜0.05）； 復(fù)方 高劑量組對(duì)血清 AST、ALT 活性和 ALB 含量有降低 趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；陽性藥組能 明顯降低大鼠血清 AST、ALT 活性和 ALB 含量（P＜ 0.05）。表明解毒護(hù)肝方能有效地改善 APAP 所致肝 損傷大鼠的肝功能。

3 討論

中醫(yī)無“藥物性肝損傷”之病名，據(jù)臨床表現(xiàn)可 將其歸為“黃疸”“積聚”“脅痛”“藥物毒”等范 疇，常見的臨床證型有肝郁脾虛證、肝腎陰虛證、 氣滯血瘀證、濕熱蘊(yùn)結(jié)證、熱毒熾盛證五種，應(yīng)辨 證施治。本課題組認(rèn)為本病的發(fā)生多由短期過量用 藥、藥毒過猛或長期用藥、藥毒蓄積，導(dǎo)致肝體受 損，肝失疏泄，氣機(jī)不暢或血絡(luò)瘀滯；木遏則土 壅，土壅則脾失健運(yùn)，而致濕濁內(nèi)生，濕蘊(yùn)而化 熱。因此，肝脾失調(diào)、濕熱毒瘀為其主要病機(jī)，疏 肝健脾、理氣活血、除濕解毒為有效治法。解毒護(hù) 肝方是在逍遙丸、小柴胡湯、茵陳蒿湯三方基礎(chǔ)上 化裁而成，方中柴胡、香附疏肝解郁、條達(dá)肝氣， 為君藥；炒白芍、五味子養(yǎng)陰柔肝，黃芪、炒白術(shù) 健脾益氣，共為臣藥；黃芩、茵陳清熱除濕，楮實(shí)子益腎清肝，丹參清熱涼血、活血祛瘀，共為佐 藥；生甘草清熱解毒，并能調(diào)和諸藥，為使藥。諸 藥合用，共奏疏肝健脾、解毒除濕、活血祛瘀之功。



 

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