中藥材木通鑒定-貝爾混合器應(yīng)用

1 儀器與試藥

球 磨 儀 ( Ｒetsch 公 司，德 國，型 號(hào): MM400 型);渦旋混合器(海門市其林貝爾儀器制造 有限公司，型號(hào):VOＲTEX-5 型);三溫三控水槽(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠，型號(hào):DK-8D 型);離 心機(jī)(Sigma 公司，德國，型號(hào):1-14 型);聚合酶鏈反 應(yīng)(PCＲ)儀(Bio-Ｒad 公司，美國，型號(hào):T100 型);超 微量分光光度計(jì)( Thermo Fisher Scientific 公司，美 國，型號(hào):Nanodrop One 型);電泳儀(北京六一生物 科技有限公司，型號(hào):DYY-6C 型);凝膠成像儀(BioＲad 公司，美國，型號(hào):Gel DocTMXＲ + 型);電子天 平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，德國，型號(hào):SQP 型)。

2 方法與結(jié)果

測序峰圖利用 CodonCode Aligner v. 8. 0. 2 軟件進(jìn)行校對拼接，切除 5. 8S rＲNA 和 28S rＲNA 區(qū) 域 獲 得 ITS2 序 列，5. 8S motif 的 序 列 為 “CGAGGGCACGTCTGCCTGGGCGTCA”，28S motif 的 序 列 為“CGACCCCAGGTCAGGCGGGGCCACC”; 切 除 psbA 和 trnH 區(qū)域以獲得 psbA-trnH 序列，psbA motif 的 序 列 為 “ TCGAGCTCCAGCGACAAATGGATAA”，trnH motif 的 序 列 為“GGCGGATGTACCCAAGTGGCTCAGG”。在中藥材 DNA 條形碼鑒定 系統(tǒng)( http: / /www. tcmbarcode. cn) 對所獲得的序列 進(jìn)行 BLAST 比對，利用 MEGA-X-10. 0. 5 軟件構(gòu)建 NJ 系統(tǒng)發(fā)育樹。

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