其林貝爾GL-3250C對免疫吸附分析

1 材料與方法

主要儀器設備：UV-2600紫外可見分光光度計 ［島津企業(yè)管理（中國）有限公司］、Moshot MSX2型 倒置顯微鏡（廣州市明美光電技術有限公司）、Infinite M200型酶聯(lián)檢測儀（瑞士TECAN公司）、CO2培 養(yǎng)箱（美國Thermo Fisher Scientific公司）、Agilent 6890N型氣相色譜儀（美國Agilent公司）、GL-3250C 型磁力攪拌器（海門市其林貝爾儀器制造有限公 司）和移液器（德國Eppendorf公司）。

2 結果與分析

將載體蛋白BSA、OVA、合成半抗原及偶聯(lián)產(chǎn) 物分別用PBS緩沖液調整濃度至1.0 mg/mL后，進行 紫外吸收光譜掃描。對硫磷合成半抗原 Hapten-PA、BSA和OVA的最大吸收峰分別在283、 285和286 nm處；免疫抗原PA -BSA、包被抗原PA - OVA的吸收曲線與相應的半抗原及載體蛋白相比， 均發(fā)生明顯改變；PA-BSA和PA-OVA與各自載體蛋 白相比，在283~286 nm最大吸收峰的吸光值明顯不 同，表明人工抗原合成成功。在融合前4 d進行小鼠血清效價與抑制率檢測， 篩選效價高、抑制好的小鼠加強免疫。 融合小鼠的血清效價為8×103 ，當包被抗原PA-OVA （1.0 mg/mL）按1∶2000稀釋、血清按1∶4000稀釋時， 該融合小鼠血清對100 ng/mL對硫磷的抑制效率可 達50%，因此選擇該稀釋濃度下的抗原抗體組合進 行后續(xù)細胞篩選。

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