分析大鼠體內(nèi)白藜蘆醇膠束的藥代動力學(xué)！

白藜蘆醇( ＲESV) 是天然的非黃酮類多酚化合物，主 要來源于葡萄、花生、桑椹等，是腫瘤的化學(xué)預(yù)防劑， 也是降低血小板聚集，預(yù)防和治療動脈粥樣硬化、心腦 血管疾病的化學(xué)預(yù)防劑，廣泛應(yīng)用于保健品、醫(yī)藥和 食品等領(lǐng)域。其水溶性低、穩(wěn)定性差，生物利用度低，在 光、熱和氧化劑條件下不穩(wěn)定，易被氧化降解，在一定程 度上限制了其應(yīng)用。因此，開發(fā)安全性高、穩(wěn)定性好的 新劑型來提高白藜蘆醇的穩(wěn)定性、水溶性和生物利用 度，具有重要臨床意義。因其低溶解度、高滲透性，按 生物藥劑學(xué)分類為Ⅱ類化合物，其生物利用度主要取決 于體外溶出速度。膠束在溶液中，兩親性共聚物可自 行組裝成特定的超分子有序聚集體，形成一種穩(wěn)定、澄 清的液體制劑，有助于增加藥物的溶解度，提高生物利 用度。本研究中根據(jù)白藜蘆醇的性質(zhì)和疏水特性，以泊 洛沙姆 188 為載體，將其制成膠束，以提高白藜蘆醇的 水溶性、穩(wěn)定性，并使其半衰期延長，提高生物利用度， 擴大其臨床應(yīng)用。并以原料藥為參比制劑，探討白藜蘆 醇膠束在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器、試藥與動物

儀器: 島津 LC － 2010A 型色譜儀( 島津色譜工作站，UV 檢測器) ; AY220 型電子分析天平( SHTMADZU 公司) ; TGL － 16 g 型高速離心機( 上海安亭科學(xué)儀器廠) ; DAS 3． 0 軟件( 中國藥理學(xué)會數(shù)學(xué)藥理專業(yè)委員會) ; Vortex － 5 型渦旋混合器( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) 。 試藥: 白藜蘆醇對照品( 含量為 98% ，南京森貝伽 生物科技有限公司，批號為 111535 － 201502) ; 白藜蘆 醇原料藥( 武漢遠(yuǎn)成賽創(chuàng)科技有限公司) ; 卡馬西平對照 品( 含量為 99% ，上海哈靈生物科技有限公司，批號為 100142 － 201605) ; 白藜蘆醇膠束( 自制) ; 乙腈( 色譜純， 天津科密歐科技有限公司) 。 動物: 取 SD 大鼠 12 只，雄性，體質(zhì)量為( 250 ± 20) g， 由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物使用許可證 號為 SCXK( 遼) 2015 － 0001。

2 方法與結(jié)果

2．1 溶液制備

取白藜蘆醇對照品 10． 2 mg，精密稱定，置 250 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì) 量濃度為 40． 8 μg / mL 的白藜蘆醇對照品貯備液。 精密稱取白藜蘆醇對照品 10． 0 mg，精密稱定，與 上述同法操作，制成質(zhì)量濃度為 40． 0 μg / mL 的白藜蘆醇質(zhì)量控制貯備液。 取卡馬西平對照品 10． 1 mg，精密稱定，置 10 mL 容 量 瓶 中 ，加 甲 醇 溶 解 并 稀 釋 至 刻 度 ，搖 勻 ，即 得 1． 01 mg / mL 卡馬西平貯備液。精密量取卡馬西平貯備 液，加甲醇稀釋得質(zhì)量濃度為 25 μg / mL 的內(nèi)標(biāo)溶液。 以上溶液均于 4 ℃冰箱保存，備用。

2．2 色譜條件

色譜柱: AgilentExtendC18 柱( 150mm × 4． 6mm，5μm) ; 流動相: 乙腈 － 水( 30 ∶ 70，V / V) ; 流速: 1． 0 mL / min; 進 樣量: 30 μL; 檢測波長: 320 nm; 柱溫: 室溫。

2．3 血漿樣品處理

取血漿 100 μL，置 2 mL 離心管中，依次加入 10 μL 甲醇，10 μL 內(nèi)標(biāo)溶液，50 μL 0． 5% 醋酸，200 μL 乙腈， 渦旋混合 60 s，離心 10 min( 12 000 r / min) ，取 100 μL 上清液置進樣容器中，取 30 μL 進樣分析。

2．4 方法學(xué)考察

專屬性考察: 分別取 6 只大鼠空白血漿，除以甲醇 ( 內(nèi)標(biāo)溶液的溶劑) 替代內(nèi)標(biāo)溶液外，其余按 2． 3 項下方 法操作，得大鼠空白血漿樣品色譜圖 ( 圖 1 A); 另取空 白血漿、白藜蘆醇樣品和內(nèi)標(biāo)，及第 1 只大鼠單次給藥 后 0． 5 h 的血漿樣品，按 2． 3 項下方法操作，得模擬樣 品及實際樣品色譜圖( 圖 1 B 和圖 1 C) 。結(jié)果白藜蘆醇 的保留時間為 3． 86 min，內(nèi)標(biāo)的保留時間為 7． 25 min， 空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)和代謝物不干擾白藜蘆醇樣 品和內(nèi)標(biāo)( 卡馬西平) 的測定。 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察和定量限確定: 取標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量， 加 空 白 血 漿 稀 釋 成 質(zhì) 量 濃 度 為 10，20，51，102，204， 510，1 020，2 550 ng / mL 的系列血漿樣品，其余按 2． 3 項下方法操作，同一質(zhì)量濃度進行雙樣本分析，記錄色 譜圖。以血漿中待測物濃度( C，ng / mL) 為橫坐標(biāo)、待測 物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值( A) 為縱坐標(biāo)，采用加權(quán)最小 二乘法進行回歸運算，得直線回歸方程 。結(jié)果白藜蘆 醇質(zhì)量濃度在 10 ～ 2 550 ng / mL 范圍內(nèi)與峰面積線性 關(guān)系良好，血漿樣品的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為 Y = 0． 005 7 X + 0． 106 8，r = 0． 998 2 ( n = 8 )，最 低 定 量 限 ( LLOQ) 為質(zhì)量濃度 10 ng / mL，可滿足 SD 大鼠體內(nèi)白藜蘆醇測定的要求。

3 討論

本研究中采用熱熔擠出制劑法制備由功能性輔料 泊洛沙姆 188 與白藜蘆醇組成的藥物制劑，優(yōu)于傳統(tǒng)固 體分散體。以泊洛沙姆 188 為載體將白藜蘆醇制成膠束 后能顯著提高白藜蘆醇在大鼠體內(nèi)的生物利用度。 口服制劑出現(xiàn)雙峰的可能原因如下。
1) 由于胃按一 定時間排空，藥物分成 2 次達到小腸，造成藥物先后入 血，出現(xiàn)雙峰;
2) 藥物在胃腸道的 2 個部位吸收，有快有 慢，因而出現(xiàn)雙峰;
3) 肝 － 腸循環(huán)即經(jīng)膽汁或部分經(jīng)膽 汁排入腸道的藥物，在腸道中又重新被吸收，經(jīng)門靜脈 又返回肝臟;
4) 制劑原因，如含有速釋成分和緩釋成分;
5) 脂溶性藥物吸收后，迅速分布到組織中，在血液中藥 物代謝到一定程度后，又出現(xiàn)二次入血。由于原料藥 組并未出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象，僅白藜蘆醇膠束組出現(xiàn)雙峰現(xiàn) 象，故可排除機體本身的因素，如吸收部位和肝腸循環(huán)。 故考慮制劑的原因可能性較大。此制劑又并未含有速釋 和緩釋雙成分，即排除此因素。白藜蘆醇膠束組出現(xiàn)雙 峰現(xiàn)象的原因可能為膠束在胃中析出，排空進入腸中后 再次被吸收，待進一步研究。