淺談誘導大鼠骨質疏松的作用

骨質疏松（osteoporosis，OP）是一種以骨量減 少、骨組織微結構退化為特征，致使骨脆性增加和 易于發(fā)生骨折的全身性骨代謝疾病 。該病多見于 絕經后婦女、老年男性和多種慢性病病人，日益引 起人們的重視。當前，治療骨質疏松的藥物主要有 三類：①抑制骨吸收，如雌激素、降鈣素（CT）、雙膦 酸鹽；②促骨形成，如甲狀旁腺激素（PTH）、胰島素 樣生長因子?1（IGF?1）；③促進骨礦化，如鈣劑。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及藥物

雷奈酸鍶干混懸劑，每袋2 g， 法國施維雅藥廠，生產批號H20120291；地塞米松注 射液，每支2.5 mg，Sigma公司，生產批號H44024469； Rat IL?6 ELISA 檢測試劑盒，Rat BALP ELISA 檢測 試劑盒，Rat TRACP 5b ELISA檢測試劑盒，Rat CTX? I ELISA 檢測試劑盒，Rat OCN ELISA 檢測試劑盒， Rat HVD ELISA 檢測試劑盒；多聚甲醛、伊紅液、蘇 木素（AR級）；MEM培養(yǎng)基、南美胎牛血清，等。

1.2 主要儀器

Multlskan 酶標儀（賽默飛世爾）， DZKW?4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)），UPH?Ⅱ? 10T優(yōu)譜超純水（成都超純科技）；轉輪式切片機（徠 卡?2016，德國），TSJ?Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機 （中威電子），BMJ?Ⅲ型包埋機（中威電子），PHY?Ⅲ 型病理組織漂烘儀（中威電子），BA400Digital 數碼 三目攝像顯微鏡（麥克奧迪）；倒置生物顯微鏡AE31 （麥克奧迪），MCO?15AC 二氧化碳培養(yǎng)箱（三洋電 機）；紅外接種滅菌器MH-3000B(海門市其林貝爾)， BN?200高精密電子天平（臺灣巨林櫻花）。

1.3 實驗動物

6~8 周齡 SPF 級雌性 SD 大鼠 30 只；體質量（226±8）g；3月齡SPF級雌性SD大鼠24 只，體質量（270±12）g，購于成都達碩實驗動物有限 公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（川2013?24）， 使用許可證號：SYXK（川 2014?189）。動物處置符 合動物倫理學要求。

1.4 大鼠骨質疏松模型制備及實驗分組 6~8周齡

清潔級雌性 SD 大鼠 30 只，飼喂常規(guī)飼料，自由飲 水，清潔級飼養(yǎng)。將大鼠隨機分為5組：空白對照組 （不做處理），模型組（每周2次地塞米松1 mg/kg肌 肉注射），雷奈酸鍶高劑量組（每周 2 次地塞米松 1 mg/kg肌肉注射+每天1次灌胃雷奈酸鍶800 mg/kg）， 雷奈酸鍶中劑量組（每周 2 次地塞米松 1 mg/kg 肌 注+每天1次灌胃雷奈酸鍶600 mg/kg），雷奈酸鍶低 劑量組（每周2次地塞米松1 mg/kg肌肉注射+每天1 次灌胃雷奈酸鍶400 mg/kg），同室常規(guī)飼養(yǎng)5周，第 5 周最后 1 次給藥結束后 2 h，采集樣本，用于指標 檢測。

1.5 左脛骨組織形態(tài)學測定

處死大鼠，分離左脛 骨，用4 %多聚甲醛固定3 d，然后10 % EDTA脫鈣5 周，用電鋸從矢狀面剖開，暴露骨髓腔并取左脛骨近 端，制備常規(guī)脫鈣骨組織蠟塊，切4 μm厚骨組織切 片，HE染色，光鏡下觀察骨形態(tài)改變，每張切片選取 5個視野，取其平均值，利用MOTIC Med 6.0型圖象分 析系統(tǒng)進行骨組織形態(tài)測量，計算骨形態(tài)指標：平均 骨小梁間距（Tb.sp），平均骨小梁厚度（Tb.Th）。

2 結果

2.1 大鼠骨組織形態(tài)學觀察

HE 染色結果提示， 地塞米松模型組大鼠骨小梁變細、數量明顯減少， 排列疏松，甚至斷裂，骨小梁結構出現(xiàn)較多大的空 白區(qū)域；雷奈酸鍶中、高劑量組（600，800 mg/kg）骨小梁變粗且致密，骨連續(xù)性較好，排列較為規(guī)則（圖1）。 MOTIC Med 6.0型圖像系統(tǒng)分析，較模型組，雷奈酸 鍶中、高劑量組的平均骨小梁厚度明顯升高（P＜ 0.05），骨小梁間距明顯降低（P＜0.05）。見表1。

2.2 血清指標檢測

模型組與空白組相比，所有檢 測指標均差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），表明所選指 標，具有良好的指示作用。雷奈酸鍶高劑量組較模 型組大鼠血清IL?6、BALP、TRACP 5b、CTX?I均明顯 降低（P＜0.05，P＜0.05），OCN、25?HVD 明顯升高 （P＜0.05）。

2.3 大鼠成骨細胞增殖影響

雷奈酸鍶高、中、低 含藥血清組OD值和空白組比較，高、中劑量組有明 顯細胞增殖作用（P＜0.05）；低劑量組細胞增殖作用 不明顯（P＞0.05）。結果表明，高、中劑量雷奈酸鍶載 藥血清對大鼠成骨細胞增殖有明顯促進作用。

3 討論

骨質疏松是系統(tǒng)性骨骼性疾病，西醫(yī)認為，其 發(fā)病機制在于骨形成代謝過程中，骨吸收和骨形成 發(fā)生失衡。臨床表現(xiàn)為骨小梁變細變薄，斷裂，數 量減少，孔隙變大，生物力學性能降低，骨密度下 降，往往伴隨骨微觀結構退化和骨量降低，骨脆性 增加，病人易發(fā)生骨折 。雷奈酸鍶化學名為5［? 二 （羧甲基）氨基］?3?羧甲基?4?氰基?2?噻吩羧酸二鍶 鹽，是由穩(wěn)定態(tài)鍶原子和有機雷奈酸組成，新型 的抗骨質疏松藥物。


 

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