其林貝爾解析骨骼增高作用的要素

人體身高的決定性因素是生長(zhǎng)激素，生長(zhǎng)激素 的分泌主要與睡眠，尤 其 是 慢 波 睡 眠 ( slow wave sleep，SWS) 有關(guān)。酸棗仁是養(yǎng)心安神中藥，藥食 同源之上品，是治療各種失眠的常用中藥。酸棗 仁所含的化學(xué)成分主要有皂苷類、黃酮類、生物堿 類、三萜類、甾體類、脂肪酸類、揮發(fā)油類等。研 究表明，酸棗仁皂苷具有鎮(zhèn)靜催眠作用，但是，酸 棗仁及其所含的化學(xué)成分是否可以促進(jìn)身體增高， 尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，酸棗仁所含 的主要活性成分酸棗仁皂苷 A 具有促進(jìn)慢波睡眠， 促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)激素分泌及促進(jìn)小白鼠骨骼增長(zhǎng) 的作用。

SD 大白鼠 48 只，雌雄各半，SPF 級(jí)， 體質(zhì)量( 220 ± 20) g，動(dòng)物許可證號(hào): SCXK( 豫) 2015- 0001。昆明種健康小白鼠 30 只( 來(lái)自同一時(shí)期每胎 3 只共10 胎) ，SPF 級(jí)，雄性，1 月齡，體質(zhì)量( 16 ± 1) g，動(dòng)物許可證號(hào): SCXK( 豫) 2010-0002。同購(gòu)于河 南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物喂養(yǎng)環(huán)境: 溫度( 22 ± 2) ℃，濕度( 60 ± 10) % ，7∶00 － 19∶00 光照，噪音 ＜ 50 dB。實(shí)驗(yàn)中對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置符合科技部頒布 的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物指導(dǎo)性意見》中的相關(guān)規(guī)定。

酸棗仁提取物( 含酸棗仁總 皂苷 5% ，批號(hào): 17-0523) ，購(gòu)于陜西斯諾特生物技 術(shù)有限公司，酸棗仁皂苷 A 標(biāo)準(zhǔn)品( 批號(hào): 110734- 120106，純度 ＞ 98% ) 購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究 院; 小白鼠生長(zhǎng)激素 ELISA 試劑盒( 上海紀(jì)寧實(shí)業(yè) 有限公司，批號(hào): 201511) ; 小白鼠 5-羥色胺受體蛋 白 1A ( 5-hydroxytryptamine 1A receptor，5-HT1AＲ) ELISA 試 劑 盒 ( 上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司，批 號(hào): 201510) ; 磷酸酶抑制劑( 上海碧云天生物技術(shù)有限 公司，批號(hào): S1873) ; ＲIPA 細(xì)胞裂解液( 上海碧云天 生物技術(shù)有限公司，批號(hào): P0013B) ; 胞漿胞核蛋白提取試劑盒( 南京凱基生物技術(shù)有限公司，批號(hào): KGP150) ; BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒( 上海碧云天 生物技術(shù)有限公司，批號(hào): P0010) ; TEMED ( Amresco，批 號(hào): Amresc00761 ) ; 蛋 白 marker ( 14-120KD) ( 北京全式金生物技術(shù)有限公司，批號(hào): DM111) ; PVDF 膜 ( Millipore，批 號(hào): IPVH00010 ) ; 兔 多 抗 5- HT1AＲ( Bioss，批號(hào): Bs-1124r) ; 兔多抗 GAPDH( 杭 州賢至生物有限公司，批號(hào): AB-P-Ｒ 001) ; HＲP 標(biāo) 記羊抗兔二抗( 武漢博士德生物工程有限公司，批 號(hào): BA1054) 。

酶標(biāo)儀( Labsystems Multiskan MS，芬 蘭，352 型) ; 離心機(jī)( 湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司，型號(hào) HI650) ; 電轉(zhuǎn)儀( 北京六一儀器廠，型號(hào) DYCZ-40) ; 垂直電泳槽( 北京六一儀器廠，型號(hào) DYCZ-24DN) ; 水平搖床( 江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司，型號(hào) TS-1) ; 磁力攪拌器( 江蘇省金壇市 中大儀器廠，型號(hào) T8-1) 。

將 30 只小白鼠隨機(jī)分為 3 組， 每組 10 只，即對(duì)照組、酸棗仁提取物組、酸棗仁皂苷 A 組。48 只大白鼠隨機(jī)分為 3 組，每組 16 只，即對(duì) 照組、酸棗仁提取物組、酸棗仁皂苷 A 組。實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物適應(yīng)環(huán)境 7 d 后開始灌胃給藥。

酸棗仁提取物大白鼠按 0． 220 mg·g － 1 體質(zhì)量灌胃給藥，小白鼠按 0． 320 mg·g － 1 體質(zhì)量灌胃給藥; 酸棗仁皂苷 A 大白鼠按 0. 011 mg·g － 1 體質(zhì)量灌胃給藥，小白鼠按 0． 016 mg·g － 1 體質(zhì)量灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)藥物用蒸餾水溶 解，酸棗仁提取物混懸液，酸棗仁皂苷 A 水溶液。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每日灌胃給藥 1 次。對(duì)照組使用蒸餾水灌 胃。

分組后第 1 次測(cè)量原始 體長(zhǎng)，3 組小白鼠原始體長(zhǎng)比較無(wú)顯著差異( P ＞ 0. 05) 。實(shí)驗(yàn)用藥 20 d 后麻醉動(dòng)物，放在臺(tái)面上，將 身體拉直，用直尺測(cè)定體長(zhǎng)，從頭頂端到小白鼠臀尾 交接處即為小白鼠體長(zhǎng)，精確到 1 mm。

使用小米手環(huán) 3 進(jìn)行睡眠測(cè)定，大白鼠以 體積分?jǐn)?shù) 7% 水合氯醛( 3． 3 mL·kg － 1 ) 腹腔注射麻 醉，將小米手環(huán) 3 用透明膠帶固定于大白鼠頸部，每 1 個(gè)手環(huán)關(guān)聯(lián) 1 部包含有小米運(yùn)動(dòng)軟件的智能手 機(jī)。給藥后，在光照情況下，人員撤離，保持安靜的 環(huán)境，記錄大白鼠睡眠狀況。6 h 后取下小米手環(huán)3，通過(guò)相關(guān)聯(lián)的手機(jī)查詢大白鼠各睡眠時(shí)相的時(shí) 間。然后眼眶采血，室溫下血液自然凝固 20 min，離 心半徑 10 cm，3 000 r·min － 1 ，離心 20 min，收集上 清液，采用 ELISA 試劑盒測(cè)定血清 GH 水平。取一 半大白鼠腦組織，加入 PBS 冰浴中勻漿，離心，收集 上清液，ELISA 法檢測(cè)腦組織 5-HT1AＲ 活性。

灌胃 20 d 后酸棗仁提取物組、酸棗仁皂苷 A 組體長(zhǎng)明顯優(yōu)于 對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0． 01) ，酸棗仁提取 物組和酸棗仁皂苷 A 組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 說(shuō)明酸棗仁提取物和酸棗仁皂苷 A 都可以明顯增 加生長(zhǎng)發(fā)育期小白鼠的體長(zhǎng)，兩者作用相當(dāng)。見表 1。酸棗仁皂苷 A 可以促進(jìn)大白鼠慢波睡眠時(shí)間( P ＜ 0． 05) ，酸棗 仁提取物也可以明顯促進(jìn)大白鼠慢波睡眠，與對(duì)照 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0． 01) ，說(shuō)明藥物可 以延長(zhǎng)慢波睡眠。而兩組對(duì)異相睡眠( paradoxical sleep，PS) 期無(wú)影響。由于藥物促進(jìn)了慢波睡眠，所 以用藥組較對(duì)照組總睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)，清醒時(shí)間 減少，而酸棗仁提取物和酸棗仁皂苷 A 比較，促進(jìn) 慢波睡眠作用相當(dāng)。見表 2。

酸棗仁 提取物及酸棗仁皂苷 A 可以明顯促進(jìn)大白鼠體內(nèi) GH 的分泌，體現(xiàn)在兩組血清中 GH 明顯高于對(duì)照組 ( P ＜ 0． 01) ，說(shuō)明慢波睡眠時(shí)間的延長(zhǎng)促進(jìn) GH 分 泌增多，這與文獻(xiàn)報(bào)道相符。酸棗仁提取物組大白鼠腦組織 5-HT1AＲ 活性明 顯高于對(duì)照組( P ＜ 0． 01) ，而酸棗仁皂苷 A 組的 5- HT1AＲ 活性較對(duì)照組也有一定的增高( P ＜ 0． 05) 。、

酸棗仁提取物和酸棗仁皂苷 A 都可以促進(jìn)小 白鼠骨骼增長(zhǎng)，其機(jī)制可能是提高腦組織 5-HT1AＲ 蛋白的表達(dá)，促進(jìn)腦組織 5-HT1AＲ 的活性，從而引 起慢波睡眠的延長(zhǎng)，進(jìn)而促進(jìn)生長(zhǎng)激素的分泌。經(jīng) 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，酸棗仁提取物作用更好，但兩者沒(méi)有統(tǒng) 計(jì)學(xué)差異。酸棗仁提取物含酸棗仁皂苷 A 單體相 當(dāng)量，所以除了酸棗仁皂苷 A 外還含有其他成分， 如黃酮類、生物堿類、三萜類、甾體類、脂肪酸類、揮 發(fā)油類等。有文獻(xiàn)報(bào)道，酸棗仁中黃酮苷類物 質(zhì)斯皮諾素能通過(guò) 5-HT 系統(tǒng)的調(diào)節(jié)來(lái)發(fā)揮鎮(zhèn)靜催 眠作用。另有文獻(xiàn)報(bào)道，酸棗仁總皂苷可明顯抑 制小白鼠自發(fā)活動(dòng)，促進(jìn)睡眠，協(xié)同戊巴比妥鈉的中 樞抑制作用，拮抗苯丙胺的中樞興奮作用，其中樞抑 制作用呈一定的劑量依賴性。酸棗仁總黃酮 也能減少小白鼠自發(fā)活動(dòng)，其中樞抑制作用也呈劑 量依賴性。所以，除了酸棗仁皂苷，黃酮類也發(fā) 揮著促進(jìn)動(dòng)物增高的作用。這可能就是酸棗仁提取 物具有很好的促進(jìn)慢波睡眠從而促進(jìn)骨骼發(fā)育的作 用原理。



 

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