敷料無菌檢查辦法的樹立

殼聚糖傷口敷料產(chǎn)品含有的殼聚糖，是甲殼素的脫 乙酰產(chǎn)物，是廣泛存在于自然界的唯一堿性氨基多糖。 殼聚糖抗菌譜廣，具有良好的抗菌特性，對金黃色葡萄 球菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、表皮葡萄球菌、大腸埃 希菌、白色念珠菌等均有較好的抑制作用 。殼聚糖環(huán)境 介質(zhì)的 pH 越低，所帶氨基正電荷越多，抗菌活性也越強。 本研究中根據(jù) 2015 年版《中國藥典 ( 四部 )》通則 1101 “無菌檢查法”建立了殼聚糖傷口敷料的無菌檢查方 法，以期為該敷料類醫(yī)療器械的檢驗提供參考。現(xiàn)報道如下。

HF1500TE 型生物安全柜( 上海力申科學(xué)儀器有限 公司) ; LＲH － 250F 型生化培養(yǎng)箱、MJ 250FI 型霉菌培 養(yǎng)箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) ; VOＲTEX － 5 型渦 旋混合器( 江蘇省海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; LDZX － 80KCS 型立式壓力蒸汽滅菌器( 上海申安醫(yī)療 器械廠) 。

殼聚糖傷口敷料( 某生物科技有限公司，批號為 150801，規(guī)格為 50 mm × 40 mm) ; 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng) 基( 批號為 1702042) 、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基( 批號為 1704064) 、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基( 批號為 1703102) 、 硫 乙醇 酸鹽 流 體培 養(yǎng) 基( 批號 為 160624) 、沙 氏 葡萄 糖液體培養(yǎng)基( 批號為 1505252) ，均購自北京三藥科 技 開 發(fā) 公 司 ; 氯 化 鈉( 批 號 為 20160601) 、氫 氧 化 鈉 ( 批 號 為 20160601) ，均 購 自 天 津 市 致 遠 化 學(xué) 試 劑 有 限公司。

大腸埃希菌( Escherichia coli) [CMCC( B) 44102 ]， 金黃色葡萄球菌 ( Staphylococcus aureus) [CMCC( B) 26003]，枯草芽孢桿菌 ( Bacillus subtilis) [CMCC( B) 63501]，生 孢 梭 菌 ( Clostridium sporogenes) [CMCC( B) 64941]，白 色 念 珠 菌 ( Candida albicans) [CMCC( F) 98001]，黑曲霉( Aspergillus niger) [CMCC( F) 98003]，均 購自中國食品藥品檢定研究院，工作用菌株為第 3 代。

大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌采用胰 酪大豆胨液體培養(yǎng)基，于 30 ～ 35 ℃條件下培養(yǎng) 18 ～ 24 h; 生孢梭菌采用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，在 30 ～ 35 ℃ 條件下培養(yǎng) 18 ～ 24 h; 白色念珠菌采用沙氏葡萄糖液體 培養(yǎng)基，于 20 ～ 25 ℃條件下培養(yǎng) 24 ～ 48 h; 黑曲霉采用 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，于 20 ～ 25 ℃條件下培養(yǎng) 5 ～ 7 d 后，加入含 0． 05% 聚山梨酯 80 的無菌 0． 9% 氯化鈉溶 液，將孢子洗脫。上述 6 株菌株采用 10 倍稀釋法制得每 1 mL 含菌數(shù)小于 100 cfu 的菌懸液。試驗管: 取 20 包樣品，無菌操作，每包不同部位剪 取 1 cm × 3 cm，接種于 pH 為 7． 6 的硫乙醇酸鹽流體培 養(yǎng)基 300 mL(滅菌前加入適量 1 mol / L 的 NaOH 溶液， 使滅菌后的培養(yǎng)基 pH 為 7． 6 ± 0． 2 )，平行操作 3 次; 取 1 mL 2． 1 項下大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、生孢梭菌菌 懸液分別接入其中。另取 20 包樣品，無菌操作，每包剪取 1 cm × 3 cm，于 pH 為 7． 6 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 200 mL(滅菌前加入適量 1 mol /L 的 NaOH 溶液，使滅菌 后的培養(yǎng)基 pH 為 7． 6 ± 0． 2)中，平行操作 3 次; 取 1 mL 2． 1 項下枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉試驗菌分別 接入其中。同時測定接種的菌數(shù)，吸取制得的大腸埃希 菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌試驗菌懸液 1 mL，置 90 mm 無菌平皿中，傾注溫度不超過 45 ℃融化的胰酪大 豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，于 35 ℃下倒置培養(yǎng)、計數(shù)。 量取白色念珠菌和黑曲霉試驗菌懸液 1 mL，置 90 mm 無 菌平皿中，傾注溫度不超過 45 ℃ 融化的沙氏葡萄糖瓊 脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，于 25 ℃ 下倒置培養(yǎng)、計數(shù)。量 取生孢梭菌試驗菌 1 mL，直接接種到 12 mL 硫乙醇酸 鹽流體培養(yǎng)管中，于 35 ℃條件下靜置培養(yǎng)、計數(shù)。

殼聚糖能抑制多種細菌的生長與活性，可能是因為 殼聚糖中含有大量的正電基團，對帶有負電荷細菌的電 荷平衡造成破壞，抑制細菌的活性。在 pH 為 7． 6 時，殼 聚糖不再具有抗菌效果，這是由于不帶電荷的氨基酸殘 基比例的增加及與其更低的可溶性所致。已有文獻試驗 證明，添加金屬離子對殼聚糖抗菌性的影響，如鈉離子、 鎂離子，濃度越高，殼聚糖抗菌活性越低，這可能與金屬 離子能和殼聚糖形成螯合物有關(guān)。同時，陰離子表面活 性劑的加入也能使殼聚糖抗菌活性下降，這可能是因為 殼聚糖分子中的帶正電的氨基與表面活性劑中的陰離子 結(jié)合，降低了抗菌基團的數(shù)量，從而降低了抗菌活性。