其林貝爾脫色搖床在對卵巢儲備功能的使用

卵巢儲備功能下降是指卵巢內(nèi)所剩卵母細胞的數(shù)量、 質(zhì)量、潛能下降，導致女性生育力下降，性激素缺乏，常 指雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)＜6 個，抗苗勒管激素 ( AMH) 值低 于 0. 5～ 1. 1 ng /mL。治療方法以激素補充治療 ( HＲT) 為主，但長時間應用后會增加卵巢癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜 癌的發(fā)生風險，患者依從性差; 對有生育要求而采用體 外受精-胚胎移植 ( IVF-ET) 的患者，也存在著周期取消率 高、獲卵率及優(yōu)胚率低等問題，從而導致不良結(jié)局。

1 材料

1. 1 動 物

8 周 齡 SPF 級 雌 性 SD 大 鼠 65 只，體 質(zhì) 量 ( 210±10) g，購自浙江省實驗動物中心，動物合格證號 SCXK ( 浙) 2014-0001，自 由 飲 水 和 攝 食，室 溫 ( 22 ± 2) ℃，相對濕度 50% ～ 70%，晝夜各 12 h。

1. 2 試劑

雷公藤多苷片 ( 浙江得恩德制藥有限公司， 50 mg /片，批號 Z33020422) 。坤泰膠囊 ( 貴陽新天藥業(yè)股 份有限 公 司，0. 5 g /粒，批 號 Z20000083) ; 戊 酸 雌 二 醇 ( 補佳樂) ( 拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司，1 mg /片，批號 J20130009) ; 黃體酮膠囊 ( 安琪坦) ( 浙江仙琚制藥 股份有限公司，0. 1 g /片，批號 H20041902) 。

1. 3 儀器

CX21 型高分辨顯微鏡 ( 日本 Olympus 公司) ; ABI7500 型 Ｒeal-time PCＲ 儀 ( 美 國 Applied Biosystems 公 司) ; Mastercycler nexus PCＲ 儀、臺式高速冷凍離心機 ( 德 國 Eppendorf 公司) ; 垂直電泳槽、電泳儀 ( 美國 Bio-Ｒad 公司) ; TS-1000 型脫色搖床 ( 海門市其林貝爾儀器制造公 司) ; TS-12F 型生物組織自動脫水機 ( 孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀 器有限公司) ; BMJ-M 型病理組織包埋機和包埋冷凍臺 ( 天津天利航空機電有限公司) ; EnSpire 2300 型 酶 標 儀 ( 上海巴玖實業(yè)有限公司) 。

2 方法

65 只大鼠適應性喂養(yǎng) 6 d，期間進行陰 道脫落細胞涂片觀察，確認所有大鼠動情周期變化規(guī)律， 隨機分為正常組 10 只、模型組 55 只。參照高慧等方法，將雷公藤多苷片以生理鹽水配成 50 mg /kg 劑量，每日 上午 9 點開始連續(xù)灌胃 14 d，正常組大鼠同時予等體積生 理鹽水。造模第 8 天起，進行陰道脫落細胞學涂片，觀察 大鼠動情周期變化，剔除造模失敗者后隨機分為模型組、 西藥組各 11 只，以及坤泰膠囊組、中西藥組各 12 只。西 藥組 對 處 于 動 情 前 期 的 大 鼠 先 給 予 戊 酸 雌二醇片 ( 0. 12 mg /kg) 2 d，再給予黃體酮膠囊 ( 18 mg /kg) 2 d， 對處于動情后期的大鼠給藥順序恰好相反; 坤泰膠囊組灌 胃給藥劑量 0. 5 g /kg; 中西藥組在坤泰膠囊基礎(chǔ)上加用上述 2 種西藥; 正常組、模型組大鼠灌胃給予等體積生理鹽 水。給藥期間，各組大鼠按體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量，連續(xù)給 藥 3 個動情周期。藥物干預結(jié)束后 15 d ( 保證所有大鼠處于動情 前期) 大鼠禁食不禁水，第 2 天水合氯醛麻醉，腹主動脈 取血，無菌下迅速取出卵巢組織，稱定質(zhì)量，一半置于 －80 ℃冰箱中待測，另一半置于 4%多聚甲醛中待測。 將置于 4%多聚甲醛中的大鼠卵巢組織用 梯度乙醇脫水，石蠟包埋，切片，脫蠟，常規(guī) HE 染色， 光學顯微鏡下觀察卵巢變化。

3 結(jié)果

給予雷公藤多苷片的 55 只大鼠呈現(xiàn)不同 程度的動情周期紊亂，表現(xiàn)為延長與停滯。連續(xù)灌胃 2 周 后，46 只大鼠出現(xiàn)連續(xù)動情周期紊亂，造 模 成 功 率 為 83. 6%; 2 周治療結(jié)束后，陰道脫落細胞涂片顯示 28 只大 鼠動情周期恢復 ( 28 /46，60. 9%) ，其中模型組 3 只 ( 3 / 11，27. 3%) ，西藥組 8 只 ( 8 /11，72. 7%) ，坤泰膠囊組 8 只 ( 8 /12，66. 7%) ，中西藥組 9 只 ( 9 /12，75%) 。與正常組比較，模型組 血清 AMH、E2 水 平 顯 著 降 低，LH、FSH 水 平 顯 著 升 高 ( P＜0. 05) ; 與模型組比較，坤泰膠囊組、中西藥組、西藥 組 AMH、E2 水平顯著升高 ( P＜0. 05) ，中西藥組、西藥組 FSH、LH 水平顯著降低 ( P＜0. 05) 。

4 討論

雷公藤多苷是一種細胞毒性藥物，對機體內(nèi)分裂增殖 較快的細胞作用明顯，導致其 DNA 堿基錯配，引起 DNA 鏈斷裂，對卵巢的卵泡細胞有較強毒副作用，近年來被廣 泛用于卵巢儲備功能下降模型的建立，該方法所需時間短， 成功率高，簡便易行，致病途徑與人類相同，而且符合模型卵巢組織萎縮，卵泡、黃體數(shù)量、卵泡顆粒細胞減少， 炎細胞浸潤等特點。造模劑量及時間參照文獻 ，以 50 mg /( kg·14 d) 造模最理想。中醫(yī)并無 “卵巢儲備功能下降”這一病名，但可將其 歸于 “不孕癥”“月經(jīng)過少”“月經(jīng)后期” “血枯” “閉經(jīng)” 等范疇，認為腎藏精，主生殖，腎虛是本病根本病機，腎 虛陰陽失調(diào)，影響及心，心不靜則腎不實，久而必致腎虛， 心腎子宮軸失調(diào)，產(chǎn)生各種復雜病變; 國醫(yī)大師夏桂成認 為，本病主要病機為 “心腎不交”，主要治法為 “交濟心 腎，以調(diào)心為主”。坤泰膠囊系由仲景名方 “黃連阿膠湯” 化裁而來，方中熟地、阿膠、白芍、茯苓滋腎陰，養(yǎng)精血， 黃連、黃芩清熱瀉火，能有效改善因卵巢功能減退而引起 的癥狀; 現(xiàn)代藥理研究表明，方中熟地、白芍具有雌激素 樣作用，可升高婦女血清 E2 水平; Huang 等 認 為，坤泰膠囊等中藥可能通過調(diào)節(jié) GnＲH 分泌來促進卵泡 發(fā)育與排卵，改善子宮血流，調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜。



 

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