信號通路的要素探討

１ 材料儀器

高速臺式冷凍離心機(jī)（ＪＷ－３０２１ＨＲ）： 安徽嘉文；水 平 搖 床（ＴＳ－１０００）：海 門 市 其 林 貝 爾； 自動(dòng)曝光 儀（ＪＳ－１０７０Ｐ）：上 海 培 清；熒 光 定 量 ＰＣＲ 儀（ＰＩＫＯＲＥＡＬ９６）：ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ。抵當(dāng)陷胸湯：全瓜蔞３０ｇ，桃仁１５ｇ，水 蛭、虻蟲、制大黃、清半夏各１０ｇ，黃連５ｇ；由安徽中 醫(yī)藥大學(xué)國醫(yī)堂門診部提供，煎煮濃縮制備成凍干 粉。

２ 結(jié)果

每組取肝臟組織１００ｍｇ， 加入細(xì)胞裂解液１ｍＬ，離心后取上清液測總蛋白濃 度；經(jīng)１０％ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳進(jìn)行分離，將分離蛋白轉(zhuǎn) 移到ＰＶＤＦ膜上，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后用５％脫脂奶粉室溫封 閉２ｈ；根據(jù)一抗的說 明 書，ＴＧＦ－β１、Ｓｍａｄ３ 和 ｐ－ Ｓｍａｄ３抗體屬性為兔抗１∶１０００稀釋，４ ℃過夜，取出 ＰＶＤＦ膜，加 ＰＢＳＴ 洗 滌 液 洗３次；根 據(jù) 二 抗 的 說 明 書，按照１∶１００００用二抗稀釋液稀釋，室溫孵育２ｈ；使 用ＥＣＬ發(fā)光試劑盒檢測 ＴＧＦ－β１、Ｓｍａｄ３和 ｐ－Ｓｍａｄ３ 的蛋白表達(dá)水平。

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