流感病毒監(jiān)控分析（貝爾渦旋儀使用）

1　材料

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit、QIAamp? Viral RNA mini Kit（52904）、RNeasy? Mini Kit （74104），均購自 QIAGEN 公司；2×SmartHyb 雜交液，購自北京美萊博醫(yī)學(xué)科技有限公司；雜交 圍欄，購自博奧（北京）生物技術(shù)有限公司。通用 引物 Uf：TCACTTGCTTCCGTTGAGG；通用引物 Ur：TAMRA-GGTTTCGGATGTTACAGCGT。 引 物均由上海生工生物公司合成。  高速微量離心機（Sigma，USA）；水浴鍋 （PolyScience，美國）；渦旋儀（江蘇海門市其林貝爾公司）；生物安全柜（NU，美國）；恒溫 鼓風(fēng)干燥箱（中國智成）；Eppendorf Mastercycler PCR 儀（Eppendorf AG，德國）；PerkinElmer ScanArray Gx plus（PE，美國）。

2　方法

取擴增產(chǎn)物 5.2 μL、雜交質(zhì)控探針 0.8 μL 和 2×SmartHyb 雜交液 6 μL 于 0.2 mL PCR 管中，混 勻；95 ℃變性 5 min，立即冰浴 3 min，4 000 r/min 離心 5~10 s，然后將離心管放回冰??；在雜交盒的 溝槽中加入 200 μL 蒸餾水，以防止雜交體系蒸發(fā)， 然后將芯片正面向上放入盒中；將已變性的雜交樣 品從冰盒中取出，用槍頭輕輕吹吸 3~5 次后，取 7 μL 雜交混合液加到探針點陣區(qū)，迅速蓋上蓋片 和雜交盒并密封；將雜交盒水平放入 52 ℃的水浴 鍋中，雜交 2.5 h。

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