抗血小板藥效相關(guān)基因多態(tài)性分析

動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病( ASCVD) 被稱(chēng)為“發(fā)達(dá) 國(guó)家居民健康的頭號(hào)殺手”，在發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率也 日趨增高 。血小板的粘附、活化和聚集在 ASCVD 的病 理生理過(guò)程中起重要作用。常用抗血小板聚集藥物阿司 匹林是防治 ASCVD 的基石。2006 年，美國(guó)預(yù)防服務(wù)工 作組將服用阿司匹林作為心血管疾病高危人群成本效 益和臨床價(jià)值較高的預(yù)防措施 。但部分患者服藥后出 現(xiàn)阿司匹林抵抗( AR) ，發(fā)生率為 5． 5% ～ 60% 。AR 受 遺傳、細(xì)胞和臨床等多方面因素影響，目前有多種單核 苷酸多態(tài)性( SNP) 被報(bào)道與 AR 相關(guān)，如環(huán)氧合酶 － 1 ( COX － 1) 基因多態(tài)性、血小板糖蛋白( GP) Ⅱb /Ⅲa 基 因多態(tài)性、二磷酸腺苷( ADP) 受體 P2Y1 基因多態(tài)性、 血小板糖蛋白Ⅰa /Ⅱa 受體基因多態(tài)性等。

1 資料與方法

1．1 研究對(duì)象

選取醫(yī)院心血管內(nèi)科 2018 年 4 月至 9 月收治的 需口服阿司匹林治療的 ASCVD 患者 358 例( 年齡 18 ～ 80 歲，性別不限) 。排除有阿司匹林禁忌證，3 個(gè)月內(nèi)發(fā) 生過(guò)腦出血，1 個(gè)月內(nèi)進(jìn)行過(guò)重大手術(shù)，以及嚴(yán)重感染、 惡性腫瘤和免疫系統(tǒng)疾病患者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理 委員會(huì)批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書(shū)。

1．2 儀器與試藥

儀器: Fluotec 48E 型微量熒光檢測(cè)儀( 西安天隆科 技 有限 公 司) ; Sorvall TM LegendTM Micro 17R 型 離 心機(jī) ( Thermo Scientific 公司) ; LX － 300 型迷你離心機(jī)和 Vortex － 5 漩渦混合器( 海門(mén)其林貝爾儀器制作有限公司) 。 試藥: 阿司匹林腸溶片 (Bayer Vital GmbH，進(jìn)口藥 品注冊(cè)證號(hào) H20130339，規(guī)格為每片 100 mg)。測(cè)序反應(yīng) 通用試劑盒( 北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司) 。

1．3 阿司匹林抗血小板藥效相關(guān)基因多態(tài)性檢測(cè)

采集患者靜脈血 2 mL，置乙二胺四乙酸( EDTA) 抗 凝管中，經(jīng)裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫、純化，得樣本 DNA 片 段，然后經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)( PCR) 進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)焦磷酸 測(cè)序法測(cè)定基因多態(tài)性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS 24． 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。正態(tài)分布的連續(xù)性變量以 X ± s 表示，行雙側(cè) t 檢驗(yàn); 計(jì)數(shù)資料以百分率 (% )表示，行 χ 2 檢驗(yàn)。P ＜0． 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

358 例患者中，GPⅢaPLA2( T ＞ C) 基因均為野生 型，無(wú)突變; PEAR1( G ＞ A) 基因野生( GG) 型 111 例，突 變雜合( GA) 型 180 例，突變純合( AA) 型 67 例，突變率 68． 99% ; PTGS1( － 842A ＞ G) 基因野生( AA) 型 356 例， 突變雜合( AG) 型 2 例，突變率 0． 56% ; GP1BA( 5792C ＞T) 基因野生( CC) 型 307 例，突變雜合( CT) 型 48 例，突變 純合( TT) 型 3 例，突變率 14． 25% 。詳見(jiàn)表 1。

統(tǒng)計(jì)患者基因型時(shí)，排除 2 例 PTGS1 位點(diǎn)突變雜合 型，基于 GPⅢа PLA2 和 PTGS1 均為野生基因型，依據(jù) PEAR1 和 GP1BA 基因型分組。PEAR1 基因野生型 111 例 ( 31． 18% ) ，突變型 245 例( 68． 82% ) ，GP1BA 基因野生型 305 例( 85． 67% ) ，突變型 51 例( 14． 33% ) 。納入患者按基 因型的不同分組，野生組與突變組患者一般資料比較，差 異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞0． 05) ，具有可比性。

3 討論

阿司匹林是治療和預(yù)防心腦血管疾病的主要藥物， 但部分患者即使規(guī)律服用阿司匹林仍會(huì)發(fā)生 AR。目前， AR 的發(fā)生機(jī)制尚未研究清楚，以往研究提示，抗血小板 藥物代謝及作用過(guò)程中涉及的相關(guān)基因多態(tài)性可能是 重要因素。研究較多的阿司匹林代謝相關(guān)基因有 COX、 血小板膜糖蛋白、PEAR1 及 PTGS1 等。血 GP 受體 GPⅢa 基因外顯子 2 第 1 565 位基因 突變后，GPⅢa 蛋白 33 位點(diǎn)亮氨酸( PLA1) 被脯氨酸 ( PLA2) 置換，影響血小板的最終激活。SZCZEKLIK 等監(jiān)測(cè)了攜帶 PLA 等位基因的 80 名健康男性服用阿司 匹林前后出血時(shí)間的改變，結(jié)果攜帶 PLA2 等位基因的 人 出 血 時(shí) 間 較 攜 帶 PLA1 等 位 基 因 者 短 ，提 示 攜 帶 PLA2 等 位 基 因 者 更 易 發(fā) 生 AR。GPIb 是 由 GPIbα 和 GPIbβ 2 個(gè)亞基構(gòu)成，其表達(dá)減少會(huì)引發(fā)血小板的聚集 和釋放。FUJIWARA 等發(fā)現(xiàn)，在 110 例健康男性受試 者中，血小板膜 GP1bα 多肽( GPIBA) 基因型為CC 或 CT 的，與基因型為 TT 的相比，AR 風(fēng)險(xiǎn)增加。