喃香豆素成分的含量測(cè)定和分析

白芷是一味重要的傳統(tǒng)中藥，為傘形科植物白 芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． F 或 杭 白 芷 A． dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． F． var． formosana ( Boiss．) Shan et Yuan 的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。臨床應(yīng) 用廣泛，具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、消腫排膿之功效， 用于治療風(fēng)寒感冒、鼻淵頭痛、風(fēng)濕痹痛等癥。

超高效液相色譜系統(tǒng)( Waters Acquity UPLC HClass System，配 備 有 Acquity UPLC QSM、Acquity UPLC Sample、Manager FTN、Acquity UPLC PDA Detector 以及 Empower2 工作站) ; KQ-300DE 超聲波清 洗器，昆山市超聲儀器有限公司; CPA225D 電子天 平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司; FA2004B 電 子天平，上海佑科儀器儀表有限公司; Legend Micro 17Ｒ 微量離心機(jī)，Thermo Scientific; VOＲTEX-5 渦旋 儀，其林貝爾儀器制造有限公司; YKF-150 EDI 超純 水設(shè)備，杭州華新凈水有限公司。

歐前胡素( HI041232198 ) 、異歐前胡素 ( HI041233198) 、水和氧化前胡素( HA061413198) 、 佛手柑內(nèi)酯 ( HB204394198 ) 、 白當(dāng)歸素( HB157470198) 、花椒毒酚( HX106886198) 、氧化前 胡素( HA062924198) 、花椒毒素( HA061509198) 、補(bǔ) 骨脂素( HP018120198) ，均購(gòu)自寶雞辰光生物科技 有限公司，純度＞ 98%。實(shí)驗(yàn)用甲醇、乙腈均為色譜 純( 美國(guó) Fisher 公司) ，其余為分析純; 水為屈臣氏 純凈水。10 批不同產(chǎn)地的白芷藥材信息見(jiàn)表 1，經(jīng) 陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中 心劉世 軍 副 教 授 鑒 定，為 白 芷 A． dahurica 的 干 燥根。

采用 ACQUITY UPLC BEH C18( 2. 1 mm×50 mm， 1. 7 μm) 色譜柱; 流動(dòng)相為水( A) -乙腈( B) ; 梯度洗 脫，洗脫程序?yàn)? 0 ～ 5 min，10% ～ 25% B; 5 ～ 18 min， 25% ～ 60% B; 18 ～ 22 min，60% ～ 90% B; 22 ～ 25 min，90% ～10% B; 25～30 min，10% B; 流速為0. 2 mL·min－1 ; 進(jìn)樣量為2 μL; 柱溫25 ℃; 檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為254 nm。9 個(gè)指標(biāo)性成分的理論塔板數(shù)均不低于16 000，此色譜條 件檢測(cè)時(shí)間短，信息量豐富，可用于指紋圖譜及活性成 分含量測(cè)定分析。

精密稱(chēng)取花椒毒酚、水合氧化前胡素、白當(dāng)歸 素、補(bǔ)骨脂素、花椒毒素、佛手柑內(nèi)酯、氧化前胡素、 歐前胡素和異歐前胡素對(duì)照品適量，分別加甲醇制備成質(zhì)量濃度為 1 g·L－1 的單一對(duì)照品溶液; 精密吸取上述儲(chǔ)備液適量，混合后加甲醇稀釋?zhuān)棺罱K制成 質(zhì)量濃度分別為 50，250，50，25，25，50，500，500， 500 mg·L－1 的混合對(duì)照品溶液。

精密吸取 2. 2 項(xiàng)下混合對(duì) 照品溶液，用乙腈逐級(jí)稀釋?zhuān)瑩u勻。分別按 2. 1 項(xiàng)下 色譜條件進(jìn)樣分析，進(jìn)樣量為 2 μL，測(cè)定峰面積。 以峰面積為縱坐標(biāo)( Y) ，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)( X) ，繪 制各標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到花椒毒酚、水合氧化前胡素、白 當(dāng)歸素、補(bǔ)骨脂素、花椒毒素、佛手柑內(nèi)酯、氧化前胡素、歐前胡素和異歐前胡素的線(xiàn)性回歸方程和線(xiàn)性 范圍，9 個(gè)呋喃香豆素成分在各濃度范 圍內(nèi)的線(xiàn)性關(guān)系良好。取混合對(duì)照品溶液，按 2. 1 項(xiàng) 下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄 10 個(gè)呋喃香豆素成 分的峰面積，計(jì)算 ＲSD，各呋喃香豆素成分峰面積 的 ＲSD 在 1. 6% ～ 2. 9%，表明儀器精密度良好。 按 2. 3 項(xiàng)下方法制備供試品 溶液，室溫下放置，按 2. 1 項(xiàng)下色譜條件分別在 0， 2，4，8，12，24，48 h 時(shí)進(jìn)樣分析，測(cè)定各呋喃香豆素 成分的峰面積，計(jì)算 ＲSD，各呋喃香豆素成分峰面 積的 ＲSD 在 2. 3% ～ 3. 0%，說(shuō)明樣品在 48 h 內(nèi)穩(wěn)定 性良好。按 2. 3 項(xiàng)下方法平行制備 6 份的供試品溶液，2. 1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算 10 個(gè)呋喃香豆素成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的 ＲSD，ＲSD 在 1. 2% ～ 3. 1%，說(shuō)明方法的重復(fù)性良好。 精密稱(chēng)取已測(cè)定的供試 品樣品 9 份，每份為 1 g，分別加入低、中、高 3 個(gè)濃 度的對(duì)照品混合液，每個(gè)濃度 3 份，按 2. 3 項(xiàng)下方法 平行制備供試品溶液，2. 1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定 10 個(gè) 呋喃香豆素的峰面積，并計(jì)算計(jì)算加樣回收率和 ＲSD。各呋喃香豆素成分的平均加樣回收率在 91. 80% ～ 101. 6%; ＲSD 小于 2. 6%。

本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)提取溶劑、藥材-溶液比以及超聲 提取時(shí)間等條件進(jìn)行了系統(tǒng)考察，以提取方法穩(wěn)定 可行，提取效率最優(yōu)，色譜峰響應(yīng)、分離度良好為指 標(biāo)，最終選擇的提取溶劑為純甲醇、藥材-溶液比為 1 ∶20、超聲提取時(shí)間為 1. 5 h。用 PDA 檢測(cè)器對(duì)樣 品進(jìn)行 190 ～ 400 nm 全波長(zhǎng)掃描，比較各波長(zhǎng)下色 譜圖，各呋喃香豆素成分均在 254 nm 有較大吸收， 因此選定 254 nm 為含量測(cè)定波長(zhǎng)。

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