混合器的酒糟微生物多樣性分析

1 材料

MastercyclerPCＲ 儀 ( 德 國 Eppendorf 公司) ; PowerPac3000 電 泳 儀 ( 美 國 Bio-Ｒad 公 司) ; Iontorrent 高通量測序平臺、Pico-21 臺式離心 機 ( 美國 Thermo Fisher 公司) ; GL-88B 漩渦混合 器 ( 海門其林貝爾儀器制造有限公司) 。采用 CTAB 法分別 提取酒曲與酒糟中微生物基因組 DNA。具體步驟 為樣品預(yù)處理，CTAB 法 提 取 緩 沖 液，采 用 Tris 酚、氯仿、異戊醇抽提，異丙醇沉淀，70%乙醇洗 滌，DNA 溶解及 ＲNA 酶酶解等。再用 1%瓊脂糖 凝膠電泳檢測 DNA 純度和濃度，－20 ℃保存?zhèn)溆?。?用 引 物 ( 341F、806Ｒ) 和 引 物 ( ITS1F、ITS2Ｒ) 分 別 對 細(xì)菌 16S rDNA 的 V3-V4 區(qū)和真菌內(nèi)源轉(zhuǎn)錄間隔 ITS1 區(qū)進行 PCＲ 擴增，產(chǎn)物使用 2%瓊脂糖凝膠進 行電泳檢測回收，并用 GeneJET 膠回收試劑盒純 化，利用單端測序的方法，構(gòu)建小片段文庫，構(gòu)建 好的文庫經(jīng)過 Qubit 定量和文庫檢測合格后，再采 用 IonS5TM XL 測序平臺進行上機測序 ( 北京諾禾致源科技股份有限公司) 。

2 方法與結(jié)果

另有未 得 到 分 類 學(xué) 注 釋 的 菌 群 豐 度 值 為 8%，其他真菌菌門豐度值小于 1%。 相對于酒曲，酒糟中細(xì)菌在門分類水平上還包括相 對豐度值較大的放線菌門和藍(lán)細(xì)菌門，并有未得到 分類學(xué)注釋的菌群; 而真菌群中兩者在門分類水平 上種 類 差 異 較 小，但各菌門的相對豐度值差異 較大。由于高通 量測序技術(shù)分析酒曲與酒糟檢測出大量微生物，多 數(shù)菌群相對豐度值較低，為方便直觀查看，擬選擇 在屬水平上的優(yōu)勢菌屬 ( 豐度≥1. 0%) 進行統(tǒng) 計，其他 菌 門 ( 豐 度 ＜ 1. 0%) 同 樣 歸 納 為 其 他 ( Others)。也可能是宜賓地區(qū)酒曲特有的微生 物體系，這與當(dāng)?shù)氐闹魄毦叩赜蛐蕴厣芮邢? 關(guān)。而對于酒曲和酒糟間存在微生物體系的較大差 異性，則可能與廠家發(fā)酵生產(chǎn)白酒的環(huán)境 ( 原料、 用水、空氣、窖池等) 及樣品的加工與儲存環(huán)境 相關(guān)。

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