在小鼠體內(nèi)的組織分析

1 材料 

1.1 儀器 

2695 型高效液相色譜（HPLC）儀（美國(guó) Waters 公 司）；64R 型低溫高速離心機(jī)（德國(guó) Beckman 公司）； BT25S型電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；HSC-12B型水 浴氮吹儀（上海旦鼎國(guó)際貿(mào)易有限公司）；QL-901 Vortex 型渦旋混合器（江蘇海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司）；T18型高速分散機(jī)（德國(guó)IKA公司）；Scientz-ⅡD型 超聲波細(xì)胞破碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。 

1.2 藥品與試劑 

AP 對(duì)照品（批號(hào)：2015109，純度：≥99％）、AP 原料 藥（批號(hào)：XC2014122，純度：≥98％）均購(gòu)自西安小草植 物科技有限公司；聚乙烯吡咯烷酮（PVP，天津博迪化工 有限公司）；水溶性維生素E（TPGS，美國(guó)Sigma公司）； 甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。 

1.3 動(dòng)物 

清潔級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，2月齡，體質(zhì)量（20± 2）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物使用 許可證號(hào)：SYXK（黑）2018-007。

2 方法與結(jié)果

色譜柱：Shimadzu ODS-SP（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30，V/V）；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL。精密稱(chēng)取 AP 對(duì)照品 4.89 mg，溶于適量甲醇中，制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn) 溶液。用甲醇將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋成不同質(zhì)量濃 度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4 ℃冰箱中保存，備用。取小鼠空白血漿100 μL至離 心管中，加入甲醇500 μL，渦旋振蕩，混勻，以8 000 r/min 離心 5 min，吸取上清液，以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)眉状? 100 μL 復(fù)溶，以 10 000 r/min 離心 5 min，吸取上清液適 量，進(jìn)行HPLC定量分析。

3 討論

采用蛋白沉淀法對(duì)血漿/組織樣品進(jìn)行處理， 并比較了乙腈和甲醇作為沉淀劑的蛋白沉淀效果。結(jié) 果發(fā)現(xiàn)，以甲醇作為沉淀劑的效果更好，因此本研究選 擇甲醇作為蛋白沉淀劑。由于AP的溶解性極差，且目前并無(wú)市售的口服制 劑，故本研究采用復(fù)合溶媒[聚乙二醇-乙醇-生理鹽水 （5∶2∶3，V/V/V）]對(duì) AP 原料藥進(jìn)行溶解。與常用乳劑 參比制劑相比，復(fù)合溶媒所含輔料少、制備方法簡(jiǎn)單且穩(wěn)定性好，以復(fù)合溶媒溶解的AP溶液作為參 比制劑，進(jìn)行體內(nèi)組織分布研究及靶向性評(píng)價(jià)。

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