大鼠肺內(nèi)的組織分析（其林貝爾渦旋儀使用）

慢性阻塞性肺病( chronic obstructive pulmonary disease，COPD) 是一種以氣流受限為主要特 征的慢性肺部疾病。最初表現(xiàn)為用力時的呼 吸困難。隨著病情加重，患者會在休息時也感到 呼吸困難，嚴(yán)重時會威脅至患者生命。據(jù)報道， 2015 年全球約有1. 75 億成年人患有 COPD，其 中每年約有 320 萬人死于 COPD，是致死率排名 第四的疾病。隨著環(huán)境污染的加劇和吸煙人 口的增加，COPD 的患者數(shù)量仍在快速增長，預(yù)計 至 2030 年，致死率將上升至第三位。

1 儀器與材料

高效液相色譜系統(tǒng): 5410 紫外吸收檢測器、 5310 色譜柱恒溫箱、5210 自動進(jìn)樣器、5220 泵 ( 日立( 中國) 有限公司) ，Thermo BDS HYPEＲSIL C18色譜柱( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm，賽默 飛世爾( 中國) 科技有限公司) ，F(xiàn)ＲITSCH6 型行 星式球磨機(jī)( 德國 Fritsch 公司) ，Büchi B 290 型 Mini 噴霧干燥儀( 瑞士 Büchi 實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公 司) ，F(xiàn)ＲESCO21 型冷凍離心機(jī)( 賽默飛世爾( 中 國) 科技有限公司) ，渦旋儀( 海門市其林貝爾儀器制 造 有 限 公 司) ，MicroSprayer  AerosolizerModel IA-1C、Dry Powder Insufflator TM -Model DP4、Model LS-2-Ｒ( 美國 Penn-Century 公司) 。 布地奈德( budesonide，BUD，湖北葛店人福 藥業(yè)有限責(zé)任公司) ，普朗尼克( F68，巴斯夫中國 有限公司) ，透明質(zhì)酸鈉( sodium hyaluronic，HA， 含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥ 96. 8，重均分子質(zhì)量為 1470 ku， 數(shù)均分子質(zhì)量為 703 ku，山東福瑞達(dá)生物醫(yī)藥有 限公司) ，篩分乳糖( Ｒespitose SV003，荷蘭 DFE Pharma 公司) ，布地奈德粉吸入劑( pulmicort turbuhaler，瑞典 Astra Zeneca 公司) ，醋酸曲安奈德 ( 武漢東康源科技有限公司) ，注射用生理鹽水 ( 色譜純，吉林省都邦藥業(yè)股份有限公司) ，烏拉 坦( 分析純，天津市凱信化學(xué)公司) ，甲醇( 色譜 純，天津市康科德科技有限公司) ，冰醋酸( 分析 純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司) ，乙酸乙酯 ( 色譜純，山東禹王和天下新材料有限公司) 。 健康 SD 大鼠 15 只，雄性，體質(zhì)量為 180 ～ 220 g，沈陽藥科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心，質(zhì)量合格證 號: 211002300029072，使用許可證號: SYXK( 遼) 2014 0004。 

2 方法 

2. 1 色譜條件 

色譜柱: Thermo BDS HYPEＲSIL C18 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，流動相: 甲醇 pH 3. 2 的醋酸水 溶液( 體積比為 72∶ 28) ，流速: 1. 0 mL·min － 1 ，檢 測波長: 254 nm，柱溫: 40 °C，進(jìn)樣量: 20 μL，內(nèi) 標(biāo): 醋酸曲安奈德。 

2. 2 溶液的配制 

2. 2. 1 布地奈德儲備溶液 

取布地奈德對照品約 25. 0 mg，精密稱定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，得質(zhì)量濃度為 500 mg·L － 1 的布地奈德儲備 溶液。 

2. 2. 2 布地奈德系列標(biāo)準(zhǔn)溶液 

分 別 精 密 量 取 2. 00、1. 00、0. 40、0. 20、 0. 10 mL布地奈德儲備溶液，置于 100 mL 量瓶 中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度分別為 10. 0、5. 0、2. 0、1. 0、0. 5 mg·L － 1 的布地奈德系列 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液。精 密 量 取 1. 00 mL 質(zhì) 量 濃 度 為 2. 0 mg·L － 1 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于 10 mL 量瓶中，加 甲醇稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度為 0. 2 mg·L － 1 的 標(biāo)準(zhǔn)溶液。 

2. 2. 3 內(nèi)標(biāo)溶液 

取醋酸曲安奈德標(biāo)準(zhǔn)品約 10. 0 mg，精密稱 定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻 度，搖勻，得質(zhì)量濃度為 200 mg·L － 1 的醋酸曲安 奈德 儲 備 溶 液。精 密 量 取 1. 00 mL 醋 酸 曲 安 奈德儲備溶液，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇稀釋 至 刻 度，搖 勻，即 得 內(nèi) 標(biāo) 溶 液 ( 質(zhì) 量 濃 度 為 4. 0 mg·L － 1 ) 。 

2. 3 肺組織樣品的處理 

大鼠處死后迅速解剖，在氣管第一環(huán)節(jié)處將 其剪斷，取出帶有完整氣管的肺組織( 此過程在 5 min內(nèi)完成) ，生理鹽水洗去表面的血漬，濾紙擦 干，將肺葉鋪展于干燥的表面皿內(nèi)，用鈍器輕輕地 對肺葉進(jìn)行密集的橫切操作，然后將肺泡從細(xì)支 氣管慢慢刮下( 細(xì)支氣管有韌性，不易被切斷或 刮斷) ，最后用手術(shù)剪分別將細(xì)支氣管、支氣管和 氣管剪開，分離成氣管、支氣管、左細(xì) 支氣管、右細(xì)支氣管、左肺泡、右肺泡6 個部分， 于 － 20 °C 下冷凍保存，待處理。

3 討論 

布地奈德是一種具有局部抗炎作用的糖皮質(zhì) 激素。用于 COPD 治療時，其主要的作用部位為 末端細(xì)支氣管。因此，吸入的布地奈德制劑最 理想的狀態(tài)是能夠較多地沉積在末端細(xì)支氣管， 利于其進(jìn)一步的發(fā)揮療效。本文作者將肺部組織 分離成氣管、支氣管、左右細(xì)支氣管、左右肺泡等 6 個部分，考察了 3 種處方的布地奈德經(jīng)氣管內(nèi) 給藥后在肺組織的分布。結(jié)果顯示，BUD-NEM 在細(xì)支氣管分布最多，BUD-NC 次之，而 BUD-PT 主要沉積在氣管、支氣管部位，在細(xì)支氣管分布最 少。這可能是因?yàn)榕c市售藥相比，BUD-NEM 的 空氣動力學(xué)粒徑相對較小，大部分粒子能夠到達(dá) 氣道深處，將更多的布地奈德遞送至靶部位，同 時，其黏附性可增加布地奈德在靶部位的滯留時 間，使其更好的發(fā)揮局部藥效。

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