震蕩器在大鼠炎性反應的調節(jié)中的使用

過敏性鼻炎（ａｌｌｅｒｇｉｃｒｈｉｎｉｔｉｓ，ＡＲ）是由 免 疫 球 蛋白 Ｅ（ＩｇＥ）介導的Ⅰ型變態(tài)反應，臨床上以鼻癢、 打噴嚏、流清涕、鼻塞等為主要癥狀，嚴重影響了患 者的生活、學習和工作。ＡＲ 的發(fā) 病 機 制 尚 未 完 全清楚，目前普遍認為 ＡＲ 是一種由多種炎性細胞 和細胞因子共同參與的鼻黏膜炎性疾病。研究發(fā)現(xiàn)，轉化生長因子具有致炎和抗炎的雙重作用，在 正常環(huán)境下可促進組織修復，抑制炎性反應的發(fā)展， 而過 度 產(chǎn) 生 的 ＴＧＦ－β１ 則進 一 步 導 致 炎 性 反 應 加 重。

６周齡ＳＰＦ 級雄性 健 康 Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只，體 質量１５０～２００ｇ，由浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供，許可 證 號 ＳＣＸＫ（滬）２０１３－００１６。飼養(yǎng) 環(huán) 境： 分籠飼養(yǎng)，室溫２１～２５ ℃，濕度６０％～７０％。常規(guī) 顆粒飼 料 喂 養(yǎng)，正 常 飲 水，１２ｈ晝夜 節(jié) 律。按 照 隨 機數(shù)字表將大鼠隨機分為正常對照組、模型組、藥物 組、穴貼組，每組１０只。實驗過程中對動物的處置 符合科技部頒布的《關于善待實驗動物的指導性意 見》。

卵白蛋 白 （美 國 Ｓｉｇｍａ公 司），氫 氧 化 鋁 粉 末 （上海阿拉丁生化科技有限公司），丙酸氟替卡松鼻 噴霧劑（英 國 ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ公司），大鼠ＩｇＥ 酶 聯(lián)免疫吸附試驗（ＥＬＩＳＡ）試劑盒（美國 Ｃｕｓａｂｉｏ公 司），大鼠 ＴＧＦ－β１ＥＬＩＳＡ 試劑盒（杭州聯(lián)科生物技 術有限公司），生白芥子粉、延胡索粉、生甘遂粉、細 辛粉（均購自浙江省中醫(yī)院中藥房）。酶標 儀 ＭＫ３ （美國 ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司），ＱＢ８００２ 震 蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司），４０２Ｂ超 聲霧化機（江蘇魚躍醫(yī)療設備股份有限公司），低溫離心機（德 國 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司），石蠟 切 片 機（德 國 Ｌｅｉｃａ公司），光學顯微鏡（ｅｃｌｉｐｓｅ８０，Ｎｉｋｏｎ公司）， 格林藍 德（ｍａｒｏｌａｎｄｉＥＩＳ－ＧＭ ｖ５．５．４３０４８）病理 信 息管理軟件。

對模型組、藥物組、穴貼組采用卵白蛋白注射及 鼻黏膜刺激法建立 ＡＲ大鼠模型：以卵白蛋白１０ｍｇ、 氫氧化鋁粉末１０ｍｇ及０．９％氯化鈉溶液１ｍＬ混 合后腹腔注射，隔日１次，連續(xù)７次，作為基礎致敏。 第１５天起進行加強免疫，給予５％卵白蛋白５０!Ｌ滴 鼻／側和ｌ％卵白蛋白噴霧吸入１０ｍｉｎ（３ｍＬ／ｍｉｎ）， 每日１次，連續(xù)９ｄ。正常對照組予等量０．９％氯化 鈉溶液腹腔注射、滴鼻和霧化，方法同模型組。

穴貼組：將生白芥子粉、延胡索粉、生甘遂粉、細 辛粉按１∶１∶０．５∶０．５的比例混勻后用生姜汁調和 成糊狀，做成藥餅（長×寬×高＝０．７ｃｍ×０．７ｃｍ× ０．３ｃｍ），置４ ℃冰箱 中 備 用。選 取 大 鼠 背 部 雙 側 “肺俞”“脾俞”“腎俞”穴，穴 位 定 位 參 考《實 驗 針 灸 學》。穴區(qū)脫毛備皮，０．９％氯化鈉溶液清潔局部， 在本研究開始的第２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６天，將制 作好的藥餅用醫(yī)用膠布固定于上述穴區(qū)，每次貼敷 ２ｈ，２ｈ后揭去膠布和藥餅，０．９％氯化鈉溶液清潔 穴區(qū)局部，共貼敷７次。 藥物組：借助微量移液器予丙酸氟替卡松滴鼻 （５ !Ｌ／側，依據(jù)成人用量通過千克體質量劑量折算 系數(shù)法換算），每日１次，連續(xù)１４ｄ。 正常對照組：借助微量移液器予等量０．９％氯化 鈉溶液滴鼻（５!Ｌ／側），每日１次，連續(xù)１４ｄ。

分別于治療前（第２３天）和治療后（第３７天）將 每只大鼠置于透明箱中３０ｍｉｎ，分別對所有大鼠鼻 癢、噴嚏、流涕等行為學指標進行評分。鼻癢：搔鼻 １～５次為１分，６～１０次為２分，多于１１次為３分； 噴嚏：１～３個 為 １ 分，４～６ 個 為 ２ 分，６ 個 以 上 為 ３分；流 涕：溢 至 鼻 孔 為 １ 分，明 顯 流 滴 出 鼻 孔 為 ２分，涕流滿面及掛滿須毛為３分。將３個 指 標 的 分數(shù)相加即為總行為學評分。 ＥＬＩＳＡ法檢測各組大鼠血清中ＩｇＥ、ＴＧＦ－β１含 量：評分后大鼠心臟取血４～５ｍＬ，３０００ｒ／ｍｉｎ、４℃離 心１５ｍｉｎ，取上清液，置于－８０ ℃冰箱 中 保 存 待 測。 根據(jù) ＥＬＩＳＡ 試劑盒的步驟進行操作，酶標儀檢測結 果得到樣品的吸光度值，利用標準曲線方程計算出 ＩｇＥ、ＴＧＦ－β１的含量。 蘇木素伊紅（ＨＥ）染色法觀察大鼠鼻黏膜 ＥＯＳ浸潤情況：采 血 后，１０％水合 氯 醛３００ ｍｇ／ｋｇ腹腔 注射麻醉大鼠，心臟放血處死。剝除上頜骨皮膚，取 大鼠鼻中隔黏膜放入１０％甲醛溶液中固定，依次乙 醇梯度脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋，４ ℃保存。切 片，厚度為５ !ｍ，ＨＥ 常規(guī)染色，每組大鼠選擇２張 切片，每張光學顯微鏡下隨機選取１０個高倍視野觀 察 ＥＯＳ浸潤情況。‘

治療前，與正常對照組比較，模型組、藥物組和穴 貼組大鼠行為學評分明顯升高（Ｐ＜０．０５），提示造模 成功。治療后，與正常對照組比較，模型組大鼠行為 學評分明顯升高（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，藥物組和 穴貼組大鼠行為學評分明顯下降（Ｐ＜０．０５）；藥物組 與穴貼組之間差異無統(tǒng)計學意義（Ｐ＞０．０５）。見圖１。

３ 討論

ＡＲ以鼻黏膜 炎 性 反 應 為 特 征，若 不 及 時 控 制 則長期的炎性刺激可導致鼻黏膜上皮細胞損傷及杯 狀細胞化生、細胞外基質沉積，最終導致鼻黏膜組織 重塑并發(fā)生不可逆轉的改變。ＡＲ 癥狀是炎性反 應的具體表現(xiàn)，在本研究中，穴貼組的行為學評分較 模型組明顯下降，且穴貼組、藥物組之間差異無統(tǒng)計 學意義，表明穴位貼敷可以有效控制炎性反應，從而 改善 ＡＲ癥狀，其治療效果和丙酸氟替卡松相當。 ＡＲ為ＩｇＥ介導的Ⅰ型變態(tài)反應，ＩｇＥ為親細胞 抗體，通過其Ｆｃ段與肥大細胞或嗜堿性粒細胞表面 的高親和力ＩｇＥＦｃ受體結合，導致兩者的活化和脫 顆粒，進一步釋放出炎性介質，使鼻黏膜充血水腫、 分泌物增加，病理上以大量 ＥＯＳ等炎性細胞浸潤為 特征，其數(shù)量可反映鼻黏膜局部的炎性反應程度。 減少 ＥＯＳ在鼻黏膜局部的募集和浸潤，是減輕鼻黏 膜炎性損傷的重要途徑。本研究 中，穴 貼 組 ＡＲ 大鼠血清ＩｇＥ含量較模型組明顯下降，鼻黏膜無明 顯 ＥＯＳ浸潤，說明 穴 位 貼 敷 可 以 有 效 減 少 ＥＯＳ浸 潤，減輕機體的炎性反應程度。